PELO Plasmide Double Nickase (h): sc-405192-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PELO Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PELO Double Nickase Plasmid (h) e il PELO Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PELO. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PELO Antibody (F-4): sc-393418
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PELO Plasmide Double Nickase (h) | sc-405192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PELO Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PELO (pelota homolog) codifica un fattore di recupero ribosomiale conservato che riconosce i ribosomi bloccati durante la traduzione e promuove la risoluzione di mRNA aberranti, sostenendo l’omeostasi globale della traduzione e la sorveglianza degli mRNA. PELO agisce insieme a HBS1L nelle vie del no-go decay e del controllo qualità dei ribosomi, facilitando la dissociazione dei complessi 80S arrestati e il riciclo delle subunità ribosomiali. Attraverso il suo ruolo nella proteostasi e nell’adattamento allo stress, un’alterata attività di PELO può influenzare il controllo del ciclo cellulare, i programmi di differenziamento e la suscettibilità a stress proteotossico e genotossico. La disregolazione delle reti di controllo qualità della traduzione che coinvolgono PELO è stata associata a fenotipi del neurosviluppo e a stati cellulari correlati al cancro, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sul metabolismo dell’RNA e sulla fedeltà della sintesi proteica.
PELO Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PELO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PELO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PELO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PELO interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.