Pellino 2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402305-ACT

Das humane PELI2-Gen kodiert Pellino 2, eine E3-Ubiquitin-Ligase, die dazu beiträgt, die Signalgebung von Mustererkennungsrezeptoren mit nachgeschalteten entzündlichen und antiviralen Antworten zu koppeln. Pellino 2 ist an der ubiquitinabhängigen Regulation von Adapter- und Kinasekomplexen in den Signalwegen von Toll-like-Rezeptoren und des Interleukin-1-Rezeptors beteiligt, formt dadurch die Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalübertragung und beeinflusst die Zytokinproduktion. Durch die Modulation von Proteinumsatz und Signalstärke trägt PELI2 zur Homöostase der angeborenen Immunität sowie zu zellulären Stressantworten bei, die für Fehlregulationen entzündlicher Signalwege relevant sind. Eine veränderte Regulation der Ubiquitinierung und angeborener Immunwege unter Beteiligung von Pellino 2 wurde im Kontext immunvermittelter Krankheitsmechanismen und von Wirt–Pathogen-Interaktionen untersucht.

Pellino 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PELI2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pellino 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PELI2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PELI2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pellino 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PELI2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pellino 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pellino 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PELI2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.