Pellino 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402184-ACT

Il gene umano **PELI1** codifica **Pellino 1**, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING-like che funge da adattatore e regolatore dell’ubiquitinazione nella segnalazione immunitaria innata e adattativa. Pellino 1 partecipa alle vie del recettore Toll-like e del recettore dell’interleuchina-1 e modula l’attivazione a valle di **NF-κB** e **MAPK** plasmando l’assemblaggio dei complessi dipendente dall’ubiquitina e la durata del segnale. Attraverso questi ruoli, **PELI1** influenza la produzione di citochine infiammatorie, gli stati di attivazione dei linfociti e l’omeostasi immunitaria. Un’attività deregolata di Pellino 1 è stata associata a segnalazione infiammatoria aberrante e a meccanismi di malattia immuno-mediati, rendendolo rilevante per lo studio dei checkpoint della trasduzione del segnale e del controllo delle vie dell’ubiquitina.

Pellino 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PELI1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Pellino 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PELI1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PELI1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Pellino 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PELI1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Pellino 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Pellino 1 nelle cellule tumorali con espressione di PELI1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.