Plásmido Doble Nickase (h2) Pegasus: sc-406376-NIC-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h2)Pegasus consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Pegasus (h2) y el plásmido de doble nickasa Pegasus (h22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a IKZF5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Pegasus Anticuerpo (1B6): sc-517137
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h2) Pegasus | sc-406376-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El IKZF5 humano codifica el factor de transcripción con dedos de zinc Pegasus, un miembro de la familia Ikaros que se une al ADN para regular programas de expresión génica implicados en la diferenciación de células inmunitarias y en la estabilidad de las redes transcripcionales. IKZF5 participa en el control de procesos asociados a la cromatina y de las salidas de señalización sensibles a citocinas que determinan los estados de activación de los linfocitos y su compromiso de linaje. La actividad o expresión desregulada de IKZF5 se ha asociado con fenotipos relacionados con la inmunidad y con susceptibilidad a mecanismos de enfermedad inflamatoria y autoinmune, lo que respalda su relevancia como un nodo molecular en estudios de inmunogenética. La edición génica de IKZF5 permite la interrogación funcional de circuitos reguladores dependientes de Pegasus, el mapeo de dianas aguas abajo mediante perfiles transcriptómicos y epigenómicos, y la generación de modelos celulares diseñados para estudiar perturbaciones de vías en la biología inmunitaria humana.
Pegasus El plásmido de doble nicasa (h2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IKZF5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IKZF5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IKZF5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IKZF5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.