Peg10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406028-ACT

PEG10 (paternally expressed gene 10) kodiert Peg10, ein domestiziertes, von Retrotransposons abgeleitetes Protein, das an der Plazentaentwicklung, dem Zellüberleben und der Regulation der Proliferation beteiligt ist. Peg10 wurde mit ubiquitinabhängigem Proteinumsatz sowie mit Interaktionen mit transkriptionellen und posttranskriptionellen Regulationsprogrammen in Verbindung gebracht, was seine Rolle bei der Resistenz gegen Apoptose und der Kontrolle des Zellzyklus stützt. Eine fehlregulierte PEG10-Expression wird häufig bei Krebs und anderen proliferativen oder entwicklungsbedingten Erkrankungen beobachtet, wodurch es ein nützliches Ziel für die Untersuchung von Signalwegen ist, die Wachstum, Differenzierung und Stressantworten steuern. In humanen Zellmodellen dient PEG10 als gut untersuchbarer Knotenpunkt, um linienspezifische transkriptionelle Netzwerke und die Folgen einer aberranten Hochregulation endogener Gene zu analysieren.

Peg10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PEG10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Peg10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PEG10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PEG10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Peg10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PEG10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Peg10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Peg10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PEG10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.