Partículas Lentivirales de Activación (m) Peg1: sc-421634-LAC

Mest de ratón, también conocido como Peg1, es un gen sometido a impronta que codifica una proteína tipo hidrolasa implicada en la regulación del crecimiento embrionario, la función placentaria y la homeostasis metabólica posnatal. La expresión de Peg1 está estrechamente vinculada al patrón de desarrollo y a la biología del tejido adiposo, con funciones descritas en la adipogénesis, el balance energético y los programas de remodelación tisular. La actividad desregulada de Mest/Peg1 se ha asociado con alteraciones en la acumulación de grasa, fenotipos de crecimiento e inestabilidad epigenética relacionada con el control de la impronta. Como locus sensible al linaje y al contexto, Mest se utiliza con frecuencia para estudiar mecanismos de impronta, regulación génica del desarrollo y remodelación de vías metabólicas en sistemas modelo de ratón.

Las partículas de activación lentiviral Peg1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Mest en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Peg1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Mest, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Peg1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Mest y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.