Plasmide Double Nickase (h) PEBP2β: sc-401983-NIC

CBFB code la sous-unité bêta du core-binding factor (PEBP2β), un partenaire dépourvu de liaison directe à l’ADN qui s’hétérodimérise avec les facteurs de transcription RUNX afin de stabiliser leur fixation à l’ADN et de réguler des programmes transcriptionnels requis pour l’hématopoïèse, l’ostéogenèse et la différenciation des cellules immunitaires. Via les complexes RUNX/CBF, CBFB influence l’expression génique spécifique de lignée, le contrôle du cycle cellulaire et l’organisation du développement, l’inscrivant dans des voies qui coordonnent prolifération et différenciation. La perturbation ou le réarrangement de CBFB altère la fidélité transcriptionnelle et est associé à la biologie des malignités hématologiques, faisant de CBFB un nœud clé pour l’étude des blocages de différenciation et de la dérégulation transcriptionnelle. Son rôle de cofacteur de RUNX fournit également un cadre pour interroger les cibles en aval et les mécanismes associés à la chromatine qui contrôlent l’engagement de lignée.

PEBP2β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CBFB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CBFB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CBFB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CBFB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.