PEBP2β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401983

Übersicht

CBFB kodiert die Beta‑Untereinheit des Core‑Binding‑Faktors (PEBP2β), einen nicht an DNA bindenden Partner, der mit RUNX‑Transkriptionsfaktoren Heterodimere bildet, um deren DNA‑Bindung zu stabilisieren und Genexpressionsprogramme zu koordinieren, die die hämatopoetische Differenzierung, die Osteogenese und die Entwicklung von Immunzellen steuern. Über diesen RUNX/CBF‑Komplex trägt CBFB zur Regulation von Signalwegen bei, die Zellschicksalsfestlegung, Proliferation und linienspezifische transkriptionelle Netzwerke kontrollieren. Eine Störung der CBFB‑abhängigen Transkription wird mit abweichender Hämatopoese und Entwicklungsdefekten in Verbindung gebracht; zudem wird CBFB häufig im Kontext chromosomaler Umlagerungen und transkriptioneller Fehlregulation in Modellen hämatologischer Erkrankungen untersucht. Diese Eigenschaften machen CBFB zu einem zentralen Knotenpunkt für die Erforschung von Kooperativität zwischen Transkriptionsfaktoren, Enhancer‑Regulation und Mechanismen der Linienspezifizierung.

Das PEBP2β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CBFB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CBFB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CBFB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PEBP2β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CBFB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PEBP2β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CBFB-Exone abzielen, die für die PEBP2β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CBFB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PEBP2β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PEBP2β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CBFB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PEBP2β HDR-Plasmid (h) und PEBP2β HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CBFB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CBFB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.