Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDP2 (h): sc-406956

Présentation

La sous-unité catalytique 2 de la phosphatase de la pyruvate déshydrogénase (PDP2) est une enzyme mitochondriale qui déphosphoryle et active le complexe pyruvate déshydrogénase, favorisant ainsi la conversion du pyruvate en acétyl‑CoA et coordonnant l’entrée des carbones issus de la glycolyse dans le cycle de l’acide citrique (cycle TCA). En ajustant l’activité de la PDH, PDP2 contribue à la flexibilité métabolique, à l’équilibre rédox et à l’homéostasie énergétique cellulaire, reliant la disponibilité des nutriments au métabolisme oxydatif. Une régulation altérée de l’axe PDH–PDP est associée à la reprogrammation métabolique observée dans des troubles affectant la fonction mitochondriale et dans des contextes d’utilisation anormale du glucose et des lipides, ce qui fait de PDP2 un point d’entrée utile pour étudier la bioénergétique mitochondriale. PDP2 constitue également un levier pour analyser les signaux qui modulent l’état de phosphorylation de la PDH et les processus en aval dépendants de l’acétyl‑CoA.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PDP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PDP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PDP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PDP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PDP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PDP2 pour l'étude de la signalisation de PDP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PDP2 essentiels à la fonction de PDP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PDP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PDP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PDP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PDP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PDP2 plasmide HDR (h) et le PDP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PDP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PDP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.