PDP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406956

Descripción general

La subunidad catalítica 2 de la fosfatasa de la piruvato deshidrogenasa (PDP2) es una enzima mitocondrial que desfosforila y activa el complejo piruvato deshidrogenasa, promoviendo así la conversión de piruvato en acetil‑CoA y coordinando la entrada del carbono procedente de la glucólisis en el ciclo del TCA. Al ajustar la actividad de la PDH, PDP2 contribuye a la flexibilidad metabólica, el equilibrio redox y la homeostasis energética celular, vinculando la disponibilidad de nutrientes con el metabolismo oxidativo. La regulación alterada del eje PDH–PDP se asocia con la reprogramación metabólica observada en trastornos que afectan la función mitocondrial y en contextos de utilización anómala de glucosa y lípidos, lo que convierte a PDP2 en un nodo útil para estudiar la bioenergética mitocondrial. PDP2 también ofrece una vía para investigar las señales que modulan el estado de fosforilación de la PDH y los procesos posteriores dependientes de acetil‑CoA.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PDP2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDP2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDP2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDP2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PDP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDP2 para la investigación de la señalización de PDP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PDP2 críticos para la función de PDP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDP2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PDP2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PDP2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDP2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PDP2 (h) y el plásmido HDR PDP2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDP2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDP2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.