Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PDK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-401084-KO-2
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PDK1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h2) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PDK1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PDK1 Anticuerpo (E-10): sc-515944
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PDK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h2) | sc-401084-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La PDK1 humana (piruvato deshidrogenasa quinasa 1) codifica una quinasa mitocondrial que fosforila e inhibe el complejo piruvato deshidrogenasa, limitando la conversión de piruvato en acetil-CoA y desviando el flujo de carbono fuera del ciclo del TCA. Al modular la oxidación de la glucosa frente a la producción de lactato, PDK1 integra la detección de nutrientes con la reprogramación metabólica sensible a la hipoxia y favorece la adaptación al estrés oxidativo. Su actividad se entrecruza con vías metabólicas centrales, como la glucólisis, la respiración mitocondrial y la anaplerosis, e influye en decisiones de proliferación y supervivencia celular. La expresión o actividad desregulada de PDK1 se ha asociado con alteraciones bioenergéticas observadas en múltiples contextos de enfermedad, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por el metabolismo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PDK1 (h2) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDK1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDK1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDK1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PDK1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDK1 para la investigación de la señalización de PDK1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PDK1 críticos para la función de PDK1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDK1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PDK1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PDK1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDK1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PDK1 (h) y el plásmido HDR PDK1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDK1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDK1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.