Plasmide Double Nickase (h) PDI: sc-400676-NIC

Le gène humain **P4HB** code la **protéine disulfure isomérase** (PDI), une oxydoréductase et chaperonne multifonctionnelle qui catalyse la formation, la réduction et l’isomérisation des ponts disulfure lors du repliement des protéines dans le réticulum endoplasmique. La PDI contribue à la protéostasie du RE via la réponse aux protéines mal repliées (UPR) et la dégradation associée au RE (ERAD), et participe à la signalisation redox par des réactions d’échange thiol–disulfure. Une activité dérégulée de P4HB/PDI a été associée à des réponses au stress cellulaire altérées, à des modifications de la capacité de la voie sécrétoire et à un déséquilibre de la protéostasie observé dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment en biologie du cancer et dans des modèles de neurodégénérescence. En tant que composant central du repliement oxydatif des protéines, la PDI est fréquemment étudiée dans les voies qui régissent la maturation des protéines, la sécrétion et l’homéostasie redox.

PDI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus P4HB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de P4HB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de P4HB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de P4HB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.