Plásmido CRISPR de Activación (h) PDGF Receptor beta/PDGFRB: sc-400187-ACT

PDGFRB codifica el receptor beta del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFRβ), una tirosina quinasa receptora que se une a PDGF-BB y a ligandos relacionados para regular la proliferación, la supervivencia y la migración de células mesenquimales. Tras su activación, PDGFRβ inicia la autofosforilación y propaga señales a través de las vías PI3K–AKT, RAS–MAPK, PLCγ–PKC y STAT, coordinando la remodelación del citoesqueleto y las interacciones con la matriz extracelular. Este receptor es fundamental para el desarrollo vascular y el reclutamiento de pericitos, contribuyendo a la estabilización de los vasos y a los procesos de reparación tisular. La señalización desregulada de PDGFRB o las fusiones aberrantes de PDGFRB están implicadas en estados fibroproliferativos, angiogénesis patológica y la comunicación cruzada entre tumor y estroma, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la biología del estroma.

PDGF Receptor beta/PDGFRB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDGFRB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PDGF Receptor beta/PDGFRB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDGFRB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDGFRB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PDGF Receptor beta/PDGFRB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDGFRB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PDGF Receptor beta/PDGFRB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PDGF Receptor beta/PDGFRB en células tumorales con expresión de PDGFRB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.