PDGF-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400586

Descripción general

PDGFB codifica la subunidad B del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-B), un mitógeno secretado que forma dímeros activos de PDGF y señaliza principalmente a través de las tirosina quinasas del receptor de PDGF para regular el reclutamiento de pericitos, la maduración vascular y la proliferación de células mesenquimales. La señalización impulsada por PDGF-B activa las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ, modulando la remodelación del citoesqueleto, la quimiotaxis y la deposición de matriz extracelular en los compartimentos estromal y vascular. La desregulación de la expresión de PDGFB o la activación del eje de PDGF se ha implicado en la angiogénesis patológica, la remodelación fibrótica y los circuitos de crecimiento autocrinos o paracrinos dependientes de PDGF observados en diversos microambientes tumorales. En consecuencia, PDGFB se estudia ampliamente en la comunicación endotelio–pericito, la biología de la reparación de heridas y las redes de señalización estromal relevantes para la remodelación tisular y la biología del cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDGFB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDGFB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDGFB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PDGF-B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDGFB para la investigación de la señalización de PDGF-B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PDGFB críticos para la función de PDGF-B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDGFB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PDGF-B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PDGF-B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDGFB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PDGF-B (h) y el plásmido HDR PDGF-B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDGFB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDGFB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.