Plásmido Doble Nickase (h) PDGF-A: sc-400711-NIC

El gen humano **PDGFA** codifica el factor de crecimiento derivado de plaquetas A (PDGF‑A), un mitógeno secretado que señaliza principalmente a través del receptor de PDGF α y de dímeros α/β para regular la proliferación, migración y supervivencia de células mesenquimales. La actividad de PDGF‑A activa las cascadas de señalización MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ, que coordinan la remodelación de la matriz extracelular, el soporte angiogénico y la comunicación estroma–epitelio. La desregulación de la señalización PDGFA/PDGFR se ha implicado en la remodelación fibrótica y en la biología del microambiente tumoral, donde señales paracrinas alteradas de factores de crecimiento pueden reprogramar programas vasculares y estromales. En consecuencia, PDGFA se estudia con frecuencia en el patrón del desarrollo, en procesos asociados a la cicatrización de heridas y en transiciones del estado celular impulsadas por factores de crecimiento.

PDGF-A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PDGFA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PDGFA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PDGFA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PDGFA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.