PDE7B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411961-ACT

Das humane Gen **PDE7B** kodiert die Phosphodiesterase 7B, eine cAMP-spezifische Phosphodiesterase, die zyklisches AMP zu 5′-AMP hydrolysiert und dadurch Amplitude und Dauer der intrazellulären cAMP-Signalübertragung mitbestimmt. Durch die Kontrolle cAMP-abhängiger Signalwege wie der PKA/CREB-vermittelten Transkription sowie der nachgeschalteten Modulation von Immun- und neuronalen Signalprogrammen trägt PDE7B zur Regulation von Zellaktivierung, Differenzierung und Überleben bei. Die Expression und Aktivität von PDE7B wurden mit entzündlichen Signalnetzwerken und für die Neurobiologie relevanten Prozessen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der cAMP-Kompartimentierung und Signalintegration macht. Eine Fehlregulation PDE7B-assoziierter Signalgebung wurde in Kontexten beschrieben, die für Immunfunktionsstörungen und ZNS-bezogene Phänotypen relevant sind, was die Untersuchung als Modulator eines Signalwegs in Krankheitsmodellen unterstützt.

PDE7B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PDE7B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PDE7B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PDE7B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PDE7B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PDE7B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PDE7B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PDE7B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PDE7B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PDE7B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.