Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) PDE5A: sc-433880-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)PDE5A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PDE5A (m) y el plásmido de doble nickasa PDE5A (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Pde5a. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PDE5A Anticuerpo (D-3): sc-398747
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) PDE5A | sc-433880-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) PDE5A | sc-433880-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Pde5a del ratón codifica la fosfodiesterasa 5A (PDE5A), una fosfodiesterasa específica de cGMP que finaliza la señalización óxido nítrico–cGMP al hidrolizar el cGMP a GMP. Al controlar los niveles intracelulares de cGMP, PDE5A regula la actividad de la proteína quinasa G (PKG) y procesos posteriores, como el tono del músculo liso, la reactividad vascular, la función plaquetaria y la señalización de los cardiomiocitos. La actividad de PDE5A se integra con las vías del péptido natriurético y de la guanilil ciclasa soluble, modulando el diálogo cruzado entre nucleótidos cíclicos que influye en la homeostasis celular. Las alteraciones en la expresión de PDE5A o los desequilibrios en la vía del cGMP se han investigado en modelos de remodelado cardiovascular, disfunción vascular pulmonar y regulación neurovascular.
PDE5A El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pde5a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pde5a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pde5a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pde5a alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.