PDE4B Lentiviral Activation Particles (m): sc-422161-LAC

Das Mausgen *Pde4b* kodiert die cAMP-spezifische Phosphodiesterase PDE4B, einen zentralen Regulator der intrazellulären Second-Messenger-Signalübertragung, der cAMP-Antworten durch Hydrolyse von cAMP zu 5′-AMP beendet. Indem PDE4B die cAMP/PKA/CREB-abhängige Transkription sowie die Rückkopplung auf die MAPK-Signalgebung formt, beeinflusst es die rezeptorvermittelte Signalintegration und die zellulären Aktivierungsschwellen. Die Aktivität von PDE4B trägt zur Modulation entzündlicher Signalnetzwerke bei, einschließlich Signalwegen nach Zytokin- und Toll-like-Rezeptor-Stimulation, und wird häufig im Kontext der Funktion von Immunzellen untersucht. Eine dysregulierte PDE4B-Expression oder -Signalgebung wurde mit entzündlichen Phänotypen und neuroimmunen Prozessen in Verbindung gebracht, was PDE4B als mechanistischen Knotenpunkt in krankheitsrelevanten Pathway-Studien stützt.

PDE4B Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Pde4b-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PDE4B Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Pde4b-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PDE4B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Pde4b-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.