Plásmido Doble Nickase (h) PDE3A: sc-402183-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PDE3A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PDE3A (h) y el plásmido de doble nickasa PDE3A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PDE3A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PDE3A Anticuerpo (2D7): sc-293446
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PDE3A | sc-402183-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PDE3A | sc-402183-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La fosfodiesterasa 3A (PDE3A) es una fosfodiesterasa de nucleótidos cíclicos de doble especificidad que hidroliza cAMP y cGMP, modulando así la dinámica de los segundos mensajeros aguas abajo de la señalización mediada por GPCR y por óxido nítrico. Al controlar el recambio de nucleótidos cíclicos, PDE3A influye en procesos regulados por PKA/PKG, entre ellos la actividad de canales iónicos, la función plaquetaria y la contractilidad del músculo liso vascular, así como en una integración más amplia de señales entre las vías de cAMP y cGMP. La alteración de la actividad de PDE3A se ha asociado con fenotipos cardiovasculares y hematológicos desregulados, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de redes de señalización dependientes de nucleótidos cíclicos en células humanas.
PDE3A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PDE3A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PDE3A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PDE3A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PDE3A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.