PDCD1LG2/PD-L2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425483-ACT

Pdcd1lg2 codifica PDCD1LG2/PD-L2, um ligante de checkpoint imune expresso em células apresentadoras de antígeno e induzível em alguns tipos de células estromais e associadas a tumores, que se liga ao PD-1 em células T ativadas. A sinalização PD-L2–PD-1 atenua a ativação dirigida pelo TCR, a produção de citocinas e a proliferação por meio do recrutamento de fosfatases inibitórias e da atenuação a jusante das vias PI3K–AKT e MAPK, moldando a tolerância periférica e os pontos de ajuste inflamatórios. Em modelos murinos, a regulação de Pdcd1lg2 contribui para o controle da exaustão de células T, da polarização Th1/Th2 e do privilégio imune local dentro dos tecidos. A expressão desregulada de PD-L2 é estudada em contextos como infecção crônica, autoimunidade, imunobiologia de transplantes e evasão imune no microambiente tumoral, como um biomarcador mecanístico de imunossupressão.

PDCD1LG2/PD-L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pdcd1lg2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PDCD1LG2/PD-L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pdcd1lg2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pdcd1lg2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PDCD1LG2/PD-L2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pdcd1lg2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PDCD1LG2/PD-L2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PDCD1LG2/PD-L2 em células tumorais com expressão de Pdcd1lg2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.