Partículas Lentivirales de Activación (m) Pdcd-1: sc-422150-LAC

El gen Pdcd1 de ratón codifica Pdcd-1 (PD-1), un receptor inhibidor de punto de control inmunitario que se induce en células T activadas, células B y poblaciones mieloides, y que limita la señalización del receptor de antígeno para mantener la tolerancia periférica. Tras unirse a PD-L1 o PD-L2, PD-1 recluta la fosfatasa SHP2 para atenuar la señalización proximal del TCR/CD28 y las vías PI3K–AKT–mTOR y RAS–MAPK aguas abajo, reduciendo la proliferación, la producción de citocinas y la aptitud metabólica. La expresión de Pdcd1 es un sello distintivo del agotamiento de las células T durante la exposición crónica a antígenos y modula la dinámica del centro germinal, influyendo en la regulación inmunitaria en la infección, la inflamación y la evasión inmunitaria asociada a tumores. En modelos murinos, Pdcd1 se investiga con frecuencia para desentrañar la biología de los puntos de control, la diferenciación de células inmunitarias y los mecanismos de hiporrespuesta funcional.

Las partículas de activación lentiviral Pdcd-1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Pdcd1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pdcd-1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Pdcd1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pdcd-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Pdcd1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.