Partículas Lentivirales de Activación (h2) Pdcd-1: sc-403008-LAC-2

El gen humano PDCD1 codifica el receptor inhibidor de punto de control inmunitario PD-1 (Pdcd-1), una proteína de membrana tipo I expresada en linfocitos T activados, linfocitos B y subpoblaciones de células mieloides que restringe la señalización del receptor de antígeno para mantener la tolerancia periférica. Tras su unión a PD-L1 o PD-L2, PD-1 recluta la fosfatasa SHP2 a través de sus motivos ITIM/ITSM para atenuar la señalización proximal de TCR/CD28, limitando la actividad de las vías PI3K–AKT y RAS–MAPK y remodelando programas transcripcionales vinculados a la función efectora, el metabolismo y el agotamiento. La expresión o señalización desregulada de PDCD1 se asocia con infecciones crónicas y disfunción inmunitaria vinculada a tumores, así como con autoinmunidad, lo que refleja su papel central en el equilibrio entre la activación y la supresión inmunitarias. Los estudios de edición génica dirigida a PDCD1 y de perturbación permiten el análisis mecanístico de la señalización de puntos de control, las decisiones de destino de las células inmunitarias y las redes inhibitorias dependientes de ligando en linfocitos humanos primarios y en modelos in vitro diseñados.

Las partículas de activación lentiviral Pdcd-1 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PDCD1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pdcd-1 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PDCD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pdcd-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PDCD1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.