Plásmido CRISPR de Activación (h) Pdcd-1: sc-403008-ACT

PDCD1 codifica la proteína de muerte celular programada 1 (PD‑1; Pdcd‑1), un receptor inhibidor expresado principalmente en células T activadas y otros subgrupos inmunitarios que limita la señalización del receptor de antígeno para mantener la tolerancia periférica. Tras unirse a sus ligandos, PD‑1 recluta fosfatasas que atenúan la señalización proximal del TCR, reduciendo la actividad de las vías PI3K–AKT y RAS–MAPK y modulando la producción de citocinas, la proliferación y los programas de supervivencia. Este eje de control es fundamental para la homeostasis inmunitaria y con frecuencia está implicado en estados de exposición crónica a antígenos, donde la expresión sostenida de PDCD1 se asocia con disfunción de las células T y con puntos de ajuste inflamatorios alterados. Por ello, la regulación de PDCD1 se estudia ampliamente en contextos de inmunología tumoral, modelos de infección persistente, autoinmunidad y reprogramación transcripcional relacionada con la inmunidad.

Pdcd-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDCD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pdcd-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDCD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDCD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pdcd-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDCD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pdcd-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pdcd-1 en células tumorales con expresión de PDCD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.