Plásmido Doble Nickase (h) PD-ECGF: sc-403836-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PD-ECGF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PD-ECGF (h) y el plásmido de doble nickasa PD-ECGF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TYMP. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PD-ECGF Anticuerpo (PGF-44C): sc-47702
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PD-ECGF | sc-403836-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PD-ECGF | sc-403836-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen TYMP humano codifica la timidina fosforilasa, también conocida como factor de crecimiento endotelial derivado de plaquetas (PD-ECGF), una enzima citosólica que cataliza la fosforólisis de timidina y desoxiuridina para generar timina/uracilo y 2-desoxirribosa-1-fosfato, contribuyendo así a regular las vías de rescate de nucleótidos y el equilibrio intracelular de dNTP. Al influir en la disponibilidad de nucleósidos y en el metabolismo de los fosfatos de desoxirribosa, PD-ECGF vincula el catabolismo de las pirimidinas con las respuestas al estrés de replicación del ADN, la homeostasis de nucleótidos mitocondriales y programas celulares sensibles al estado redox. La alteración de la actividad de TYMP está implicada en la fisiopatología de la encefalomiopatía neurogastrointestinal mitocondrial (MNGIE) y se ha estudiado en contextos donde el metabolismo de nucleósidos se cruza con la señalización angiogénica y la adaptación del microambiente tumoral. Estas características convierten a TYMP en una diana útil para estudios mecanísticos del flujo de nucleósidos, la estabilidad del genoma y fenotipos asociados al metabolismo en células humanas.
PD-ECGF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TYMP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TYMP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TYMP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TYMP alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.