PCYT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416514

Descripción general

PCYT2 codifica la citidililtransferasa CTP:fosfoetanolamina, una enzima limitante de la vía de Kennedy que genera CDP-etanolamina para la biosíntesis de fosfatidiletanolamina (PE). Al controlar la disponibilidad de PE, PCYT2 influye en la biogénesis de membranas, la composición de las membranas del retículo endoplásmico y las mitocondrias, la dinámica de las gotas lipídicas y la remodelación de membranas relacionada con la autofagia. La homeostasis de fosfolípidos dependiente de PCYT2 se intersecta con el balance energético celular y con vías de señalización de estrés que responden a cambios en la composición lipídica de las membranas. La alteración genética o la actividad reducida de PCYT2 se ha vinculado a fenotipos neuromusculares y del neurodesarrollo hereditarios, lo que respalda su relevancia para modelar en células humanas mecanismos de enfermedad asociados al metabolismo de lípidos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PCYT2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PCYT2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PCYT2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PCYT2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PCYT2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PCYT2 para la investigación de la señalización de PCYT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PCYT2 críticos para la función de PCYT2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PCYT2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PCYT2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PCYT2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PCYT2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PCYT2 (h) y el plásmido HDR PCYT2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PCYT2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PCYT2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.