PCYT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416514

Übersicht

PCYT2 kodiert die CTP:Phosphoethanolamin-Cytidylyltransferase, ein geschwindigkeitsbestimmendes Enzym im Kennedy‑Weg, der CDP‑Ethanolamin für die Biosynthese von Phosphatidylethanolamin (PE) erzeugt. Durch die Kontrolle der PE‑Verfügbarkeit beeinflusst PCYT2 die Membranbiogenese, die Zusammensetzung von ER‑ und Mitochondrienmembranen, die Dynamik von Lipidtröpfchen sowie autophagieassoziierte Membranumbauprozesse. Die PCYT2‑abhängige Phospholipid‑Homöostase ist mit der zellulären Energiebalance und Stresssignalwegen verknüpft, die auf Veränderungen der Membranlipidzusammensetzung reagieren. Genetische Störungen oder eine verminderte Aktivität von PCYT2 wurden mit erblichen neuromuskulären und neuroentwicklungsbedingten Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für die Modellierung lipidstoffwechselassoziierter Krankheitsmechanismen in humanen Zellen unterstreicht.

Das PCYT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PCYT2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PCYT2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PCYT2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PCYT2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PCYT2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PCYT2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PCYT2-Exone abzielen, die für die PCYT2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PCYT2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PCYT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PCYT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PCYT2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PCYT2 HDR-Plasmid (h) und PCYT2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PCYT2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PCYT2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.