Particules Lentivirales d'Activation (h) PCTAIRE-3: sc-404867-LAC

CDK18 code la kinase sérine/thréonine PCTAIRE-3, un membre de la famille des kinases dépendantes des cyclines, impliqué dans la régulation de la progression du cycle cellulaire et des voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation dans les cellules en prolifération. L’activité de CDK18 a été reliée aux réseaux de maintien du génome et de réponse aux dommages de l’ADN, notamment à des processus qui influencent le stress de réplication et le contrôle des points de contrôle (checkpoints). Une expression ou une fonction altérée de CDK18 a été associée à des phénotypes de prolifération aberrants et a été étudiée dans le contexte de la biologie du cancer ainsi que d’autres troubles où les voies du cycle cellulaire et de réparation sont dérégulées. En tant que modulateur de circuits pilotés par des kinases, CDK18 constitue un nœud utile pour interroger les interactions entre la régulation cycline/CDK, la signalisation de stress et les programmes transcriptionnels.

Les particules d'activation lentivirales PCTAIRE-3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDK18 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PCTAIRE-3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDK18, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PCTAIRE-3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDK18 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.