Plasmide Double Nickase (h) PCTAIRE-1: sc-405470-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PCTAIRE-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PCTAIRE-1 Double Nickase (h) et le plasmide PCTAIRE-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDK16. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PCTAIRE-1 Antibody (G6.1): sc-53410
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PCTAIRE-1 | sc-405470-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PCTAIRE-1 | sc-405470-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK16 code la kinase sérine/thréonine PCTAIRE-1, un membre de la famille des CDK qui s’associe à des cyclines et à des cofacteurs régulateurs pour contrôler des programmes de phosphorylation liés à la progression du cycle cellulaire, au trafic vésiculaire, au remodelage du cytosquelette et au développement neuronal. L’activité de PCTAIRE-1 a été reliée à la protéostasie et à des processus associés à l’autophagie, notamment via la modulation des voies de renouvellement/dégradation des protéines qui influencent les réponses cellulaires au stress. Dans les cellules humaines, une expression altérée de CDK16 ou une signalisation kinase dérégulée a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, où elle peut affecter des phénotypes de prolifération, de migration et de différenciation. Ces propriétés font de CDK16 un nœud utile pour étudier les réseaux de signalisation régulés par des kinases et les interactions entre voies dans des études mécanistiques.
PCTAIRE-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK16 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK16. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK16. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK16.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.