PCNA Double Nickase Plasmid (h): sc-400037-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PCNA Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PCNA Double-Nickase-Plasmid (h) und PCNA Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PCNA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PCNA: sc-56
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PCNA Double Nickase Plasmid (h) | sc-400037-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PCNA Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400037-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PCNA (proliferating cell nuclear antigen) ist eine konservierte DNA-Gleitklemme, die doppelsträngige DNA umschließt, um die Prozessivität replizierender Polymerasen zu erhöhen und den Zusammenbau von Replikations- und Reparaturkomplexen zu koordinieren. Es dient als zentrale Plattform für Proteine mit PIP-Box-Motiven und integriert Signalweiterleitung über posttranslationale Modifikationen, einschließlich Ubiquitinierung und SUMOylierung, um Translesionssynthese, Template Switching und die Wahl des Reparaturwegs zu steuern. PCNA ist essenziell für den Verlauf der S‑Phase, die Reifung der Okazaki-Fragmente und zahlreiche Prozesse der DNA-Schadensantwort; es verknüpft Replikationsstress mit Checkpoint-Kontrolle und der Wiederherstellung des Chromatins. Fehlregulierte PCNA-abhängige Replikations- und Reparaturprogramme werden breit mit Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, die in Krebs, Neurodegeneration und anderen Erkrankungen der DNA-Erhaltung untersucht werden.
PCNA Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PCNA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PCNA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PCNA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PCNA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.