Plásmido Doble Nickase (h) PCNA: sc-400037-NIC

PCNA (antígeno nuclear de células en proliferación) es una abrazadera deslizante de ADN conservada que rodea el ADN de doble hebra para aumentar la procesividad de las polimerasas replicativas y coordinar el ensamblaje de complejos de replicación y reparación. Funciona como una plataforma central para proteínas que contienen motivos tipo PIP-box e integra señales mediante modificaciones postraduccionales, incluidas la ubiquitinación y la SUMOilación, para dirigir la síntesis de translesión, el cambio de molde y la elección de vías de reparación. PCNA es esencial para la progresión de la fase S, la maduración de los fragmentos de Okazaki y múltiples procesos de respuesta al daño del ADN, vinculando el estrés replicativo con el control de puntos de control y la restauración de la cromatina. Los programas de replicación y reparación dependientes de PCNA desregulados se asocian ampliamente con fenotipos de inestabilidad genómica estudiados en cáncer, neurodegeneración y otros trastornos del mantenimiento del ADN.

PCNA El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PCNA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PCNA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PCNA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PCNA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.