PCMT1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418153

Descripción general

PCMT1 codifica la proteína O‑metiltransferasa 1 de L‑isoaspartato proteico (D‑aspartato), una metiltransferasa dependiente de SAM que repara el daño por isoaspartilo inducido por la edad o el estrés en las proteínas mediante la metilación de residuos anómalos de Asp/Asn, lo que facilita su reconversión a enlaces normales. Esta actividad de control de calidad proteica favorece la proteostasis y limita la acumulación de proteínas disfuncionales con tendencia a agregarse, vinculando a PCMT1 con las respuestas celulares al estrés oxidativo y con el mantenimiento de proteínas de larga vida en el citosol y el núcleo. La función de PCMT1 se cruza con vías que regulan el recambio proteico, las redes de chaperonas y la resiliencia al estrés, por lo que es relevante para estudios sobre envejecimiento proteico y daño postraduccional. La alteración de la actividad de PCMT1 se ha investigado en contextos de neurobiología y otros trastornos en los que el daño proteico y los mecanismos de reparación deteriorados contribuyen a la disfunción celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PCMT1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PCMT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PCMT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PCMT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PCMT1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PCMT1 para la investigación de la señalización de PCMT1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PCMT1 críticos para la función de PCMT1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PCMT1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PCMT1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PCMT1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PCMT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PCMT1 (h) y el plásmido HDR PCMT1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PCMT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PCMT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.