Pcdhb3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430065

Descripción general

Pcdhb3 codifica la protocadherina beta 3, un miembro de la familia de protocadherinas agrupadas, implicada en la adhesión célula–célula dependiente de calcio y en el establecimiento de la identidad neuronal. En el sistema nervioso, las protocadherinas contribuyen a la formación de sinapsis, el crecimiento de neuritas y los mecanismos de autoevitación que refinan la conectividad de los circuitos neuronales. La función de Pcdhb3 se vincula a complejos de adhesión de membrana y a procesos posteriores de organización del citoesqueleto que moldean el patrón dendrítico y axonal. La desregulación de los clústeres génicos de protocadherinas se ha asociado con trayectorias del neurodesarrollo alteradas y disfunción sináptica, lo que respalda la investigación de Pcdhb3 en modelos de ensamblaje de circuitos y fenotipos neurológicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pcdhb3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pcdhb3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pcdhb3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pcdhb3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pcdhb3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pcdhb3 para la investigación de la señalización de Pcdhb3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pcdhb3 críticos para la función de Pcdhb3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pcdhb3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pcdhb3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Pcdhb3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pcdhb3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pcdhb3 (m) y el plásmido HDR Pcdhb3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pcdhb3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pcdhb3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.