Plasmide Double Nickase (h) PC-PLD2: sc-402056-NIC

Le gène humain **PLD2** code la **phospholipase D2** (PC‑PLD2), une enzyme associée aux membranes qui hydrolyse la phosphatidylcholine pour produire de l’**acide phosphatidique**, un second messager lipidique qui module la courbure membranaire et l’organisation de microdomaines de signalisation. L’activité de PLD2 s’inscrit dans des voies dépendantes des récepteurs, notamment celles de l’**EGFR**, des **GPCR** et des petites **GTPases**, et influence le trafic vésiculaire, l’endocytose, le remodelage du cytosquelette d’actine et la migration cellulaire. Via une régulation des voies **mTOR** et **MAPK** dépendante de l’acide phosphatidique, PLD2 contribue aux réponses cellulaires liées au métabolisme et à la croissance, et a été associée à des sorties de signalisation inflammatoire. Une signalisation PLD2 dérégulée a été rapportée dans divers contextes, tels que l’invasivité des cellules tumorales, la chimiotaxie des cellules immunitaires et des processus neuro‑inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la signalisation médiée par les lipides.

PC-PLD2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLD2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLD2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLD2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLD2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.