Particules Lentivirales d'Activation (m) PC-1: sc-422179-LAC

Le gène murin **Enpp1** code PC-1 (ectonucléotide pyrophosphatase/phosphodiestérase 1), une ectoenzyme présente à la surface cellulaire et également sécrétée, qui hydrolyse des substrats nucléotidiques extracellulaires afin de produire du pyrophosphate inorganique (PPi) et de moduler la signalisation purinergique. En contrôlant l’équilibre extracellulaire PPi/Pi, PC-1 régule les processus de minéralisation et de calcification et influence les programmes de remodelage de la matrice dans les tissus osseux et vasculaires. L’activité d’Enpp1 croise des voies impliquées dans la différenciation des ostéoblastes et des chondrocytes, l’homéostasie de la matrice extracellulaire et des signaux inflammatoires liés au métabolisme des nucléotides. Une dysrégulation de la fonction ENPP1/PC-1 est associée à une calcification tissulaire aberrante et à des phénotypes métaboliques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour des études de biologie du squelette, de calcification vasculaire et de signalisation liée aux maladies cardiométaboliques.

Les particules d'activation lentivirales PC-1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Enpp1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PC-1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Enpp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PC-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Enpp1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.