Partículas Lentivirales de Activación (m) PBEF: sc-425569-LAC

Nampt de ratón, también conocido como PBEF/visfatina, codifica la nicotinamida fosforribosiltransferasa, la enzima limitante de la vía de rescate de NAD que convierte la nicotinamida en NMN para mantener las reservas celulares de NAD. Al controlar la disponibilidad de NAD, NAMPT modula programas dependientes de sirtuinas y de PARP que influyen en el metabolismo mitocondrial, las respuestas al estrés oxidativo, la reparación del ADN y la señalización inflamatoria. La actividad de NAMPT vincula la detección de nutrientes con la regulación transcripcional y epigenética, afectando procesos como la activación de células inmunitarias, la biología del tejido adiposo y la adaptación al estrés celular. La desregulación del metabolismo NAMPT/NAD se ha asociado con disfunción metabólica, estados neuroinflamatorios y la reprogramación bioenergética de células tumorales, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos en modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral PBEF (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Nampt en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PBEF (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Nampt, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PBEF. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Nampt y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.