PB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403988-ACT

PBRM1 codifica a subunidade PB1 da forma PBAF do complexo de remodelamento de cromatina SWI/SNF (BAF) dependente de ATP, em que seus bromodomínios reconhecem histonas acetiladas para regular a acessibilidade de promotores e intensificadores (enhancers). Por meio da coordenação do posicionamento dos nucleossomos, PB1 ajuda a controlar programas transcricionais ligados às respostas a danos no DNA, à diferenciação e à manutenção da estabilidade do genoma. A função alterada de PBRM1 é recorrentemente associada a uma regulação epigenética comprometida e à desregulação transcricional em contextos de doença humana, incluindo cânceres, nos quais vias de remodelamento de cromatina são frequentemente perturbadas. Essas propriedades tornam PB1 um nó útil para estudar o controle do estado da cromatina sobre a expressão gênica e o redirecionamento de vias sob estresse e sinais do desenvolvimento.

PB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PBRM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PBRM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PBRM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PBRM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PB1 em células tumorais com expressão de PBRM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.