Pax Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401757-ACT

O PAX8 humano codifica um fator de transcrição da família paired box, essencial para a especificação e a manutenção de linhagem no epitélio folicular da tireoide, no desenvolvimento renal e em derivados do trato mülleriano. O Pax8 regula redes gênicas que controlam a diferenciação epitelial, a organogênese e a biossíntese hormonal, incluindo programas transcricionais que governam a expressão da tireoglobulina e do simportador sódio/iodeto em células tireoidianas. A atividade desregulada de PAX8 está implicada na disgênese tireoidiana congênita e em anomalias do neurodesenvolvimento, e fusões de PAX8 ou alterações de sua expressão são observadas de forma recorrente em contextos tumorais da tireoide e do rim. Como regulador nuclear de ligação ao DNA, o PAX8 constitui um alvo viável para o estudo do controle transcricional, da identidade celular e da reprogramação oncogênica de vias de diferenciação.

Pax-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAX8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Pax-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAX8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAX8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Pax-8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAX8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Pax-8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Pax-8 em células tumorais com expressão de PAX8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.