Plasmide CRISPR d'Activation (m) Pax-9: sc-422122-ACT

Le gène murin Pax9 code le facteur de transcription à boîte paire Pax-9, un régulateur nucléaire se liant à l’ADN, indispensable à la mise en place des patrons de développement et à l’organogenèse, avec des rôles majeurs dans la morphogenèse cranio-faciale, l’odontogenèse et les tissus dérivés des poches pharyngées. Pax-9 influence les réseaux régulateurs de gènes du développement en coordonnant des programmes transcriptionnels qui s’articulent avec la signalisation épithélio-mésenchymateuse et des voies impliquées dans la spécification et la différenciation tissulaires, notamment des processus associés à Wnt et à BMP. Une expression ou une fonction dérégulée de Pax9 a été associée à des anomalies congénitales du développement, en particulier l’agénésie dentaire et des malformations cranio-faciales, ce qui en fait un locus utile pour étudier la dose génique, la logique des enhancers et l’engagement de lignée dans les systèmes mammifères.

Pax-9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pax9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pax-9 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pax9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pax9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pax-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pax9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pax-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pax-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pax9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.