Plasmide CRISPR d'Activation (h) Pax-9: sc-403899-ACT

PAX9 code le facteur de transcription à domaine « paired box » Pax-9, un régulateur nucléaire se liant à l’ADN, indispensable à l’établissement des plans d’organisation embryonnaires et à l’organogenèse, en particulier au développement craniofacial, dentaire, thymique et des parathyroïdes. Pax-9 module les programmes de spécification des lignages en coordonnant des réseaux transcriptionnels avec d’autres régulateurs du développement, en influençant l’état de la chromatine et l’expression de gènes de différenciation en aval. Des altérations du dosage ou de la fonction de PAX9 ont été associées à l’agénésie dentaire congénitale et à d’autres anomalies du développement craniofacial, ce qui en fait un nœud pertinent pour l’étude de la morphogenèse et du contrôle du destin cellulaire. Dans des contextes adultes et pathologiques, l’expression dérégulée de PAX9 est étudiée en tant que marqueur et modulateur des états de différenciation épithéliale et du reprogrammation transcriptionnelle.

Pax-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PAX9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pax-9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PAX9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PAX9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pax-9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PAX9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pax-9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pax-9 dans les cellules tumorales présentant une expression de PAX9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.