Plasmide CRISPR d'Activation (m) Pax-7: sc-422120-ACT

Le gène murin Pax7 code le facteur de transcription à domaine paired box Pax-7, un régulateur central de la spécification, de la quiescence et de l’auto-renouvellement des cellules satellites du muscle squelettique au cours du développement et de la régénération à l’âge adulte. Pax-7 coordonne les programmes géniques myogéniques en interagissant avec le remodelage de la chromatine et des réseaux transcriptionnels déterminant la lignée, qui influencent l’équilibre prolifération–différenciation. Une activité altérée de Pax-7 perturbe l’homéostasie musculaire et fait l’objet de nombreuses études dans des contextes de régénération déficiente, de fonte musculaire et de modèles de dystrophie, ainsi que dans la biologie du rhabdomyosarcome, où les programmes d’identité myogénique sont déréglés. En tant que régulateur du développement, Pax-7 est également utilisé pour étudier les décisions de destinée des cellules souches et les voies de réparation tissulaire dans des systèmes murins.

Pax-7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pax7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Pax-7 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pax7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pax7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Pax-7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pax7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Pax-7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Pax-7 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pax7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.