PAWP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406196

Übersicht

WBP2NL kodiert PAWP (postakrosomales WW-Domänen-bindendes Protein), einen spermienbürtigen Faktor, der in der postakrosomalen Scheide angereichert ist und bei der Befruchtung zur Aktivierung der Eizelle beiträgt. PAWP enthält PPXY-Motive, die mit WW-Domänen-haltigen Signaladapterproteinen interagieren und es so mit phosphorylierungsabhängigen regulatorischen Netzwerken verknüpfen, die an frühen embryonalen Kalziumoszillationen und der Wiederaufnahme des Zellzyklus beteiligt sind. Funktionelle Studien bringen eine veränderte PAWP-Expression oder -Aktivität mit beeinträchtigter Befruchtung, abnormaler Embryonalentwicklung und bestimmten Formen männlich bedingter Infertilität in Zusammenhang. Als keimzell-spezifischer Regulator stellt WBP2NL ein gut handhabbares Modell dar, um die Signalübertragung zwischen Spermium und Eizelle, die Qualitätskontrolle von Gameten und das Zusammenspiel reproduktiver Signalwege zu untersuchen.

Das PAWP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WBP2NL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WBP2NL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WBP2NL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PAWP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WBP2NL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PAWP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WBP2NL-Exone abzielen, die für die PAWP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WBP2NL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PAWP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PAWP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WBP2NL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PAWP HDR-Plasmid (h) und PAWP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WBP2NL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WBP2NL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.