Plásmido Doble Nickase (h) PARP1: sc-400046-NIC

PARP1 codifica la poli(ADP-ribosa) polimerasa 1, una enzima nuclear que detecta roturas de hebra simple en el ADN y cataliza la poli(ADP-ribosil)ación de sí misma y de otras proteínas asociadas a la cromatina para coordinar la reparación del ADN y la remodelación de la cromatina. PARP1 desempeña un papel destacado en la reparación por escisión de bases y en la reparación de roturas de hebra simple, y se integra con las respuestas al estrés de replicación, la regulación transcripcional y las vías de estabilidad genómica mediante el reclutamiento de proteínas y la relajación de la cromatina. La actividad o expresión alteradas de PARP1 se asocian con defectos en la señalización del daño en el ADN, acumulación de mutaciones y una supervivencia celular desregulada bajo estrés genotóxico, lo que la convierte en un nodo ampliamente estudiado en modelos de transformación oncogénica y de respuesta terapéutica. PARP1 también se investiga en contextos de neurodegeneración e inflamación, donde el daño persistente en el ADN y el metabolismo de PAR pueden influir en el destino celular y en programas de expresión génica.

PARP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PARP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PARP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PARP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PARP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.