Plasmide CRISPR d'Activation (m) PARP1: sc-419018-ACT

Le gène murin **Parp1** code la poly(ADP-ribose) polymérase 1 (PARP1), un capteur nucléaire des dommages à l’ADN qui catalyse la poly(ADP-ribosyl)ation de protéines cibles à partir de NAD+ afin de coordonner le remodelage de la chromatine et le recrutement des facteurs de réparation de l’ADN. PARP1 est un acteur central de la réparation par excision de base et participe plus largement à la réponse aux dommages à l’ADN via des interactions avec la signalisation du stress réplicatif, la régulation transcriptionnelle et le maintien de la stabilité du génome. Au-delà de la réparation, l’activité de PARP1 influence les programmes géniques inflammatoires et les décisions de destin cellulaire en modulant l’accessibilité de la chromatine et le renouvellement des protéines. La dérégulation de la signalisation de PARP1 et les altérations de la dynamique de PARylation sont fréquemment étudiées en cancérologie, dans les maladies neurodégénératives et dans des pathologies immuno-associées, où l’accumulation de dommages à l’ADN et les réponses au stress façonnent des phénotypes pertinents pour la maladie.

PARP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Parp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PARP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Parp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Parp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PARP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Parp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PARP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PARP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Parp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.