Plasmide CRISPR d'Activation (h) PARP1: sc-400046-ACT

PARP1 code la poly(ADP-ribose) polymérase 1, un capteur nucléaire des dommages à l’ADN qui catalyse la PARylation d’elle-même et d’autres protéines associées à la chromatine afin de coordonner la réparation de l’ADN. PARP1 joue un rôle majeur dans la réparation par excision de bases et la réparation des cassures simple brin, et elle influence également le remodelage de la chromatine, la stabilité des fourches de réplication et la régulation transcriptionnelle via des interactions avec les histones et des protéines échafaudages de réparation. Grâce à des interactions avec la signalisation ATM/ATR et, plus largement, avec les réseaux de maintien du génome, PARP1 contribue à préserver l’intégrité génomique en conditions de stress oxydant et de stress de réplication. Une activité de PARP1 dérégulée et une capacité de réparation de l’ADN altérée sont fréquemment associées à des phénotypes d’instabilité génomique observés dans de nombreux contextes cancéreux ainsi qu’à des réponses au stress pertinentes pour la neurodégénérescence, ce qui soutient son utilisation comme cible mécanistique en recherche sur la réparation de l’ADN.

PARP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PARP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PARP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PARP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PARP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PARP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PARP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PARP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PARP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PARP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.