Plásmido CRISPR de Activación (h) PARP1: sc-400046-ACT

PARP1 codifica la poli(ADP-ribosa) polimerasa 1, un sensor nuclear del daño en el ADN que cataliza la PARilación de sí misma y de otras proteínas asociadas a la cromatina para coordinar la reparación del ADN. PARP1 desempeña un papel destacado en la reparación por escisión de bases y en la reparación de roturas de cadena sencilla, y también influye en la remodelación de la cromatina, la estabilidad de la horquilla de replicación y la regulación transcripcional mediante interacciones con histonas y andamios de reparación. A través de la comunicación cruzada con la señalización ATM/ATR y redes más amplias de mantenimiento del genoma, PARP1 ayuda a preservar la integridad genómica bajo estrés oxidativo y de replicación. La actividad desregulada de PARP1 y la capacidad alterada de reparación del ADN se asocian con frecuencia a fenotipos de inestabilidad genómica observados en múltiples contextos de cáncer y a respuestas al estrés relevantes para la neurodegeneración, lo que respalda su uso como diana mecanística en la investigación de reparación del ADN.

PARP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PARP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PARP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PARP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PARP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PARP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PARP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PARP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PARP1 en células tumorales con expresión de PARP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.