Plasmide Double Nickase (m) PARP-7: sc-430288-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) PARP-7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PARP-7 Double Nickase (m) et le plasmide PARP-7 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Tiparp. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) PARP-7 | sc-430288-NIC | 20 µg | $410.00 |
Tiparp chez la souris code PARP‑7 (poly(ADP‑ribose) polymérase induite par le TCDD), une mono‑ADP‑ribosyltransférase qui modifie des protéines cibles en utilisant le NAD+ et intervient dans la régulation transcriptionnelle ainsi que dans les voies de signalisation activées en réponse au stress. PARP‑7 est induite lors de l’activation du récepteur des hydrocarbures aromatiques (AHR) et contribue aux programmes de réponse aux xénobiotiques, en modulant les profils d’expression génique et l’adaptation cellulaire aux ligands environnementaux. En modulant, de manière dépendante de l’ADP‑ribosylation, les interactions protéiques et la stabilité des protéines, PARP‑7 influence des voies liées à la signalisation immunitaire innée, à la protéostasie et au contrôle de la croissance cellulaire. Une activité dérégulée de PARP‑7 a été associée à des états transcriptionnels inflammatoires et oncogéniques altérés, faisant de Tiparp un locus utile pour étudier les interactions environnement–gène et les interconnexions de signalisation dans des contextes pertinents pour les maladies.
PARP-7 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tiparp dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tiparp. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tiparp. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tiparp.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.