Plasmide CRISPR d'Activation (h) PARP-14: sc-402812-ACT

La PARP14 humaine (PARP-14 ; ARTD8) est une mono‑ADP‑ribosyltransférase qui catalyse l’ADP‑ribosylation de protéines cibles afin de moduler les programmes transcriptionnels, la transduction du signal et les interactions protéine‑protéine. Elle agit dans des contextes nucléaires et cytoplasmiques, intégrant des signaux issus de la signalisation des cytokines et des réponses au stress pour influencer la différenciation des cellules immunitaires, l’expression des gènes inflammatoires et la régulation du métabolisme. PARP‑14 a été associée au contrôle transcriptionnel dépendant de STAT, aux voies liées aux interférons et à la régulation de complexes associés à l’ARN et à la chromatine. Une activité ou une expression dérégulée de PARP14 a été corrélée à des altérations de la signalisation immunitaire et a été étudiée dans le contexte de l’inflammation, de la fibrose et de la biologie tumorale, comme un nœud reliant les réponses aux cytokines à la production transcriptionnelle.

PARP-14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PARP14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PARP-14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PARP14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PARP14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PARP-14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PARP14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PARP-14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PARP-14 dans les cellules tumorales présentant une expression de PARP14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.