Plásmido CRISPR de Activación (m) PARP-10: sc-437160-ACT

Mouse Parp10 codifica PARP-10, una mono(ADP-ribosil)transferasa que cataliza la MARilación de proteínas y ayuda a coordinar las respuestas celulares al estrés de replicación del ADN, la homeostasis proteica y la señalización inmunitaria innata. PARP-10 se ha vinculado con la regulación de la elección de vías de reparación del ADN y la estabilidad de la horquilla de replicación, y puede modular redes de señalización mediante la ADP-ribosilación de proteínas sustrato específicas. A través de estas actividades, PARP-10 contribuye al control de la progresión del ciclo celular, los programas transcripcionales inducidos por el estrés y las cascadas de señalización inflamatoria. La actividad desregulada de la familia PARP, incluidas las vías asociadas a PARP-10, es relevante para estudios mecanísticos de la inestabilidad genómica, la adaptación al estrés asociada al cáncer y la biología de enfermedades mediadas por el sistema inmunitario.

PARP-10 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Parp10 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PARP-10 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Parp10 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Parp10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PARP-10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Parp10 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PARP-10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PARP-10 en células tumorales con expresión de Parp10 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.