PARL CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403965-ACT

PARL (presenilin associated rhomboid like) kodiert eine Rhomboid-Serinprotease der inneren Mitochondrienmembran, die die mitochondriale Qualitätskontrolle reguliert, indem sie Substrate verarbeitet, die an Mitophagie, Cristae-Remodelling und Apoptose beteiligt sind. Die PARL-abhängige Proteolyse beeinflusst die PINK1/Parkin-Signalgebung durch Spaltung von PINK1 und moduliert damit die Reaktionen auf mitochondriale Depolarisation sowie den Organellumsatz. Indem PARL die OPA1-abhängige mitochondriale Dynamik und die mit Cytochrom c verknüpfte Anfälligkeit für Apoptose mitprägt, verknüpft es die bioenergetische Homöostase mit Stress-Signalwegen. Eine dysregulierte PARL-Aktivität und eine veränderte mitochondriale Proteostase wurden mit Neurodegeneration, metabolischer Dysfunktion und einer für Krebs relevanten mitochondrialen Reprogrammierung in Verbindung gebracht, was PARL als funktionellen Knotenpunkt in der Forschung zu mitochondrialen Signalwegen unterstützt.

PARL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PARL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PARL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PARL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PARL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PARL-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PARL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PARL-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PARL-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PARL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.