Parkin Double Nickase Plasmid (h): sc-400226-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Parkin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Parkin Double-Nickase-Plasmid (h) und Parkin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PARK2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Parkin: sc-32282
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Parkin Double Nickase Plasmid (h) | sc-400226-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Parkin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400226-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PARK2 kodiert Parkin, eine E3-Ubiquitin-Ligase der RBR-Familie, die den ubiquitinabhängigen Proteinumsatz und die mitochondriale Qualitätskontrolle koordiniert. Als Reaktion auf eine mitochondriale Depolarisation wird Parkin nachgeschaltet von PINK1 rekrutiert, um Substrate der äußeren Mitochondrienmembran zu ubiquitinieren, wodurch Mitophagie gefördert und die Dynamik der Mitochondrien umgestaltet wird. Aufgrund seiner Funktionen in der Proteostase, in Reaktionen auf oxidativen Stress und in der Aufrechterhaltung synaptischer Strukturen ist eine fehlregulierte Parkin-Aktivität mit neuronaler Vulnerabilität verknüpft und wird häufig im Kontext der früh beginnenden Parkinson-Krankheit sowie verwandter neurodegenerativer Mechanismen untersucht. Parkin greift außerdem in inflammatorische Signalwege und Pfade der metabolischen Anpassung ein, was es für Untersuchungen mitochondrialer Dysfunktion über verschiedene Zelltypen hinweg relevant macht.
Parkin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PARK2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PARK2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PARK2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PARK2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.