Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PARD6B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401699
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PARD6B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PARD6B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PARD6B Anticuerpo (B-10): sc-166405
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PARD6B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401699 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PARD6B codifica un componente central del complejo de polaridad PAR, que ayuda a establecer y mantener la polaridad apical–basal en células epiteliales y regula la división celular asimétrica. Mediante interacciones con la PKC atípica (aPKC) y otros reguladores de la polaridad, PARD6B coordina el ensamblaje de las uniones estrechas, la organización del citoesqueleto y la migración celular direccional, vinculando el control de la polaridad con vías que gobiernan la arquitectura tisular. La alteración de la señalización de polaridad se asocia con desorganización epitelial, adhesión modificada y fenotipos invasivos, lo que hace que PARD6B sea relevante para estudios sobre progresión tumoral y metástasis. Los programas de polaridad dependientes de PARD6B también son importantes durante el desarrollo y la diferenciación, donde el control espacial de la señalización y la integridad de las uniones moldean la organogénesis.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PARD6B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PARD6B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PARD6B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PARD6B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PARD6B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PARD6B para la investigación de la señalización de PARD6B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PARD6B críticos para la función de PARD6B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PARD6B para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PARD6B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PARD6B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PARD6B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PARD6B (h) y el plásmido HDR PARD6B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PARD6B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PARD6B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.