Plásmido CRISPR de Activación (h) PARD6B: sc-401699-ACT

El gen humano **PARD6B** codifica Par-6 beta, una proteína de andamiaje de polaridad con dominio PDZ que ensambla el complejo de polaridad PAR junto con PAR3 y la PKC atípica para establecer la polaridad apical–basal y coordinar la formación de uniones estrechas. A través de interacciones con pequeñas GTPasas como **CDC42** y **RAC1**, PARD6B contribuye a regular la dinámica del citoesqueleto, la división celular orientada y la morfogénesis epitelial, con efectos posteriores sobre la migración y la arquitectura tisular. La señalización de polaridad alterada que involucra a PARD6B se ha asociado con desorganización epitelial y fenotipos invasivos en contextos relevantes para el cáncer, y también se estudia en procesos del desarrollo y en la función de barrera. Como nodo de señalización en las uniones célula–célula, PARD6B ofrece un punto de entrada manejable para diseccionar programas transcripcionales y fenotípicos dependientes de la polaridad.

PARD6B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PARD6B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PARD6B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PARD6B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PARD6B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PARD6B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PARD6B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PARD6B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PARD6B en células tumorales con expresión de PARD6B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.