Paralemmin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422109

Descripción general

Palm codifica la paralemina, una fosfoproteína asociada a membrana enriquecida en neuronas que regula la dinámica de la membrana plasmática, la formación de filopodios y el crecimiento de neuritas mediante andamiaje anclado a lípidos en la corteza celular. La paralemina participa en la remodelación del citoesqueleto y en procesos de maduración sináptica que moldean la conectividad neuronal y la plasticidad dependiente de la actividad. En el ratón, la expresión de Palm se asocia con el patrón de desarrollo de las prolongaciones neuronales y la organización de las espinas dendríticas, lo que la vincula a vías que gobiernan el tráfico de membranas, la remodelación de la actina y la estructura de la sinapsis. La alteración de la arquitectura de membrana y sináptica asociada a la paralemina se ha estudiado en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, donde la conectividad y la morfología de las espinas alteradas son lecturas experimentales habituales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Paralemmin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Palm en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Palm junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Palm tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Paralemmin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Palm para la investigación de la señalización de Paralemmin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Palm críticos para la función de Paralemmin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Palm para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Paralemmin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Paralemmin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Palm. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Paralemmin (m) y el plásmido HDR Paralemmin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Palm para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Palm definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.