Parafibromin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401334-ACT

CDC73はパラフィブロミンをコードしており、パラフィブロミンは核内の腫瘍抑制因子として、PAF1転写制御複合体の中核成分として機能し、RNAポリメラーゼIIの伸長過程およびクロマチンに関連した遺伝子制御を統括します。パラフィブロミンは、ヒストン修飾や、増殖・分化に関わる転写プログラムに影響を与えることで、エピジェネティックな制御と細胞周期の制御にも寄与します。これらの役割を通じてCDC73は、Wnt/β-カテニン応答性遺伝子発現と交差する経路を含む複数のシグナル伝達状況において、ゲノムの安定性と均衡の取れた転写出力を維持するのに役立ちます。CDC73機能の破綻は、内分泌系および副甲状腺関連の腫瘍形成、ならびにより広範な増殖制御の破綻と関連しており、がん生物学および転写制御の機構研究における重要な標的となっています。

Parafibromin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDC73の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Parafibromin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDC73 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDC73転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Parafibrominの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDC73遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるParafibromin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDC73発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるParafibromin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。